實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
食管癌細胞;Eca-109[Eca109] | 貼壁生長 | EY-X63550 |
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細胞名稱 食管癌細胞;Eca-109[Eca109]
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 此細胞的STR與Hela細胞的STR一致。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: PN
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠結(jié)締組織L細胞株929克?。?/span>
dparasiticus2-溴-4-氟-6-Human TCTN3 ELISA Kit
小鼠雜交瘤;AFM20092C9用途: 生物防治3-溴-5-氟甲苯Human TDP1(Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1) ELISA Kit
小鼠雜交瘤;AFG20081C8拉丁屬名: Bacillus subtilis3-溴-5-氟甲苯Human TDRD3 ELISA Kit
雜交瘤;2D8F9H12拉丁屬名: Pseudomonas brenneri4-芐氧基吲哚Human TCF7L1 ELISA Kit
雜交瘤;1G10C11B12拉丁屬名: Wickerhamomyces anomalus4-芐氧基吲哚Human TCF7 ELISA Kit
雜交瘤;F3注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用4-芐氧基吲哚Human CD52(CAMPATH-1 antigen) ELISA Kit
雜交瘤;D6D注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用7-芐氧基吲哚Human TCERG1 ELISA Kit
鼠雜交瘤;TT3B9拉丁屬名: Hyphopichia burtonii7-芐氧基吲哚Human TCHP ELISA Kit
雜交瘤;Mab-boDp1-F14注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用2-氯吡啶 N-氧化物 鹽酸鹽Human TCF12/HEB ELISA Kit
雜交瘤;6B8拉丁屬名: Aspergillus japonicus(S,S)-1,2-雙[(叔丁基)甲基膦]乙烷[η-(2,5-二環(huán)庚二烯)]合四氟酸銠(I)Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) ELISA Kit
雜交瘤;ETMcAb4F11拉丁屬名: Lactococcus lactis subsp. lactis7-Methoxycoumarin-3-carboxylic acidHuman TBX15 ELISA Kit
雜交瘤;ETMcAb3A7拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae氘代正戊烷-d12Human TBX18 ELISA Kit
雜交瘤;AhMcAb 1F3拉丁屬名: Citrobacter freundii基乙縮二乙Human TBX21/T-bet ELISA Kit
雜交瘤;2F11/A9用途: 與蠶豆、豌豆共生固氮基乙縮二乙Human TBX22 ELISA Kit
食管癌細胞;Eca-109[Eca109]人抗紅細胞抗體(RBC)ELISA試劑盒SagELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒SamELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒SamELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗巨噬細胞抗體(anti-macrophageAb)ELISA試劑盒SAPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗類風濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA試劑盒SBAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗淋巴細胞抗體(ALA/LCA)ELISA試劑盒Sc1-70-AbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗磷壁抗體(TA)ELISA試劑盒SCAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗磷脂酰絲氨抗體(APSA)ELISA試劑盒SCCAg2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。