目前常用的幾種輪狀病毒Elisa試劑盒方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原，用包被液l：8000稀釋?zhuān)?00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過(guò)夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋?zhuān)?00μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。輪狀病毒Elisa試劑盒顏色變黃；用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值，陽(yáng)性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測(cè) 樣品的效價(jià)。
    利塞膦酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        20mg
    相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品        50mg
    膦甲酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        10mg
    氯甲基碳酸異丙酯標(biāo)準(zhǔn)品        100mg
    洛匹那韋系統(tǒng)適配物標(biāo)準(zhǔn)品        10mg
    相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        15mg
    美侖孕酮醋酸酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        25mg
    美侖孕酮醋酸酯相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        25mg
    相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品        30mg
    美司那相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        50mg
    美司那相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        50mg
    美托洛爾相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        20mg
    美托洛爾相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品        50mg
    標(biāo)準(zhǔn)品(2-8℃)        ea
    錳福地吡相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        15mg
輪狀病毒Elisa試劑盒